本发明涉及一种微生物发酵制备菜籽肽的方法,充分发挥微生物的水解蛋白质作用和降解硫甙作用,可以有效提高产品的可溶性氮含量和生物活性。所述微生物发酵制备菜籽肽的方法,包括以下步骤:(1)将菜籽粕粉与营养液混合制备液态发酵培养基;(2)将地衣芽孢杆菌接入液态发酵培养基,进行液态发酵;(3)发酵后的液态培养基经固液分离,得到菜籽肽的粗提液;(4)粗提液经提纯得到菜籽肽。本发明生产工艺简单、成本低,选用地衣芽孢杆菌,进行液态发酵,产生多种代谢产物和酶类,充分发挥其水解蛋白质作用和降解硫甙作用,能有效降解菜籽粕种的有毒物质,水解蛋白质,提高产品的可溶性氮含量、生物活性和菜籽肽得率。